Поиск генов, ассоциированных с плюрипотентностью

К сожалению, сегодня недостаточно информации, касающейся генов, напрямую связанных с плюрипотентностью стволовых клеток. Фактически доказано только участие Oct4 в под­держании In vivo недифференцированного состояния клеток. Поиск и обнаруже­ние других генов, специфичных для всех плюрипотентных клеток, позволит дальше исследовать их уникальный потенциал развития и изучить механизм поддержа­ния плюрипотентносги.

Находить гены, которые экспрессируются только плюрипотентными клетками, можно путем сравнения близкородственных популяций недифференцированных и дифференцированных клеток, например, внутренней клеточной массы и трофо­эктодермы ранней бластоцисты. Идентификация различно экспрессирующихся генов в предимплантационном эмбрионе технически сложна из-за ограниченного количества исследуемого материала и проводилась путем Two-dimensional анали­за белков и методом обогащения, основанном на PCR, что давало возможность идентифицировать большое количество генов. Недавно произведено сек­вестрование кДНК (комплентарной днк тест), основанное на сборе более чем 25 000 эмбриональных стволовых клетках, по­лученных из предимплантационных эмбрионов.

Библиотеки стадиеспецифических кДНК из неоплодотворенных ооцитов, зигот, 2-, 4-, 8-клеточных эмбрио­нов, морулы и ранней бластоцисты сравнивались с доступными базами данных. При этом было идентифицировано более 9700 уникальных генов, основанных на поиске таких же сходных последовательностей. Половина из них оказались новы­ми. Это подтверждает мнение о том, что многие гены, экспрессируемые предимплантационным эмбрионом, еще не охарактеризованы. Ряд из них (около 17 %), вероятно, стадиеспецифические и только около 0,1% постоянно экспрессировались во время предимплантационного развития. Пройти генетический тест вы сможете по этой ссылке.

Другой подход — сравнение эмбриональных стволовых клеток с их непосредственными дифференцирован­ными производными, минуя проблему ограниченного количества клеток, доступ­ных для анализа. Таким путем предпринимались попытки идентифицировать гены, находящиеся ниже Oct4 с помощью метода гибридизации (Supression — subtractive hybridization method). Это привело к идентификации новых генов, ко­торые могут играть роль в установлении или поддержании плюрипотентности в мышиных клетках. Более того, возникает возможность провести широкое сравни­тельное исследование кДНК с использованием микрочипов, позволяя создать про­филь геномной экспрессии этих уникальных клеток.