Главная страницаРазное Вирусы

17/04/12

Первые попытки комплементационного  анализа.




Первые попытки комплементационного и рекомбинационного анализа мутантов ортомиксовирусов осуществили R. Simpson, G. Hirst (1968), J. Mackenzie (1970) и A. Sugiura e. a. (1972). В этих исследованиях были заложены также и первые попытки выяснения механизмов рекомбинации у ортомиксовирусов. Они проводились в системе A/WSN - куриные фибробласты, соответствующей основному требованию выделения ts-мутантов, пригодных для генетического анализа, т. е. способных давать четкие бляшки для регистрации первичных и, возможно, единичных мутаций. Штамм одинаково хорошо размножался при температурах от 34 до 40°С, поэтому размножение при 39,5°С использовано как непермиссивное условие, а при 34 °С - пермиссивное, сайт Андроидопедия.

R. Simpson, G. Hirst (1968) выделили 35 индуцированных (5-фторурацилом - 23, нитрозогуанидином - 9 и азотистой кислотой - 3) и 6 спонтанных ts-мутантов, которые не образовывали бляшек при 39,5°С. Попарное заражение разными ts-мутантами в условиях нспермиссивной и пермиссивиой температур выявили 30-кратное повышение урожая по сравнению с одиночной инфекцией. При этом 75 % полученной популяции составлял мутантный фенотип (is), 25 % - рекомбинантный (ts+).

J. Mackenzie (1970) не согласился с гипотезой репликации РНК вируса гриппа в виде отдельных фрагментов и также свободного обмена ими при рекомбинации. Он провел анализ скрещивания ts-мутантов WSN в условиях строгой стандартизации процессов обработкой зараженных культур RDE и показал, что повреждения располагаются линейно, как бы вдоль одной нити РНК.

Эти несколько противоречивые результаты первых этапов анализа ts-мутаций получили теперь определенную согласованность. Прежде всего физико-химический анализ структуры генома окончательно подтвердил генетическое предсказание о его фрагментарности (Palese, 1977). Было установлено, что геном вируса гриппа состоит из восьми фрагментов РНК. Основанная на фрагментарности генома способность ортомиксовирусов к свободному переконструированию своего генома при смешанной инфекции двумя штаммами легла в основу генетического анализа ts-мутантов. По мере накопления коллекций было обнаружено 6, а затем и 8 рекомбинационно-комплемеитационных групп. Влияние биоэтики на научные исследования.



Комментарии

Чтобы оставить комментарий, необходимо войти или зарегистрироваться
Сейчас на сайте посетителей:2